產(chǎn)品介紹
細(xì)胞
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BrdU濃度(μM)
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孵育時間(min)
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A549
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40
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40
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Hela
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40
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40
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NRK-52e
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40
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40
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SKOV3
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80
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120
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H9C2
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40
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40
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動物實驗:采用生理鹽水溶解BrdU粉末,配制成10 mg/mL濃度,過濾除菌后備用。一般按照50 mg/kg的劑量,腹腔注射給藥,共4次,每次間隔2小時,最后一次注射24小時后,處死動物。
細(xì)胞實驗:對于細(xì)胞,BrdU的使用濃度和處理時間與細(xì)胞種類有關(guān)。一般來說,處理腫瘤細(xì)胞所需濃度和時間都較低,成纖維細(xì)胞或上皮細(xì)胞等增殖較慢的細(xì)胞需要提高濃度并延長作用時間,建議濃度范圍為20-100 μM,作用時間為40 min-4 h,可根據(jù)具體細(xì)胞的種類進(jìn)行摸索調(diào)整。上表為經(jīng)測試過的常用細(xì)胞處理濃度及時間,僅供參考。
Brdu說明:DNA病毒的抑制劑。在免疫組化中的應(yīng)用:BrdU標(biāo)記細(xì)胞免疫組化染色(SP法),BrdU(溴化脫氧尿嘧啶核苷)可以在體內(nèi)和體外摻入到處于S期的細(xì)胞所合成的DNA鏈中,以標(biāo)記DNA。
Brdu溶解:在1M的氫氧化銨中的溶解度為50mg/ml;也可以溶于DMF、DMSO,溶解度在50-100 mg/mL。0.16 - 500 mg/mL的Brdu可以抑制胚胎腎細(xì)胞細(xì)胞的生長,1.0 mg/mL有較強(qiáng)的抑制作用。
Brdu應(yīng)用:在免疫組化中的應(yīng)用:BrdU標(biāo)記細(xì)胞免疫組化染色(SP法),BrdU(溴化脫氧尿嘧啶核苷)可以在體內(nèi)和體外摻入到處于S期的細(xì)胞所合成的DNA鏈中,以標(biāo)記DNA。通過流式檢測BrdU的摻入量可以從單個細(xì)胞水平評價DNA合成細(xì)胞頻率。用于在單細(xì)胞水平檢測功能性激活,即同時檢測DNA合成、細(xì)胞表面激活抗原表達(dá)以及胞內(nèi)細(xì)胞因子分泌。包括在BrdU存在下培養(yǎng)激活的單個核細(xì)胞,固定通透后,以抗BrdU熒光抗體檢測BrdU的攝取。同時,以適宜濃度的DNA酶使胞內(nèi)DNA變性,加強(qiáng)摻入BrdU與抗體的親和力,同時保留胞內(nèi)蛋白結(jié)構(gòu)和熒光素?zé)晒鈴?qiáng)度。此方法避免了DNA變性條件與胞內(nèi)及表面標(biāo)志同時檢測條件的沖突。持續(xù)的BrdU的摻入可以用于確定和分析處于DNA合成活躍狀態(tài)的細(xì)胞,區(qū)分于那些處于靜止期的細(xì)胞,從而進(jìn)行細(xì)胞增殖比例的分析;另一方面,不同時間點加入BrdU,可以分析細(xì)胞周期動力學(xué)。
BrdU摻入研究已在很多實驗中得到廣泛開展,包括體外和體內(nèi)標(biāo)記實驗。
注意事項:該品對肌體有不可逆損傷的可能性。使用時應(yīng)穿防護(hù)服和戴手套。應(yīng)避免吸入本品的粉塵。